重磅上新 | 重组蛋白表达常见疑难解答系列

每一种重组蛋白表达系统都有其优缺点。根据项目的需求需要选择合适的系统。下表对比了不同蛋白表达系统的特点。

2. 蛋白标签如何选择？

重组蛋白的生产常需要对蛋白添加标签。这些标签通常可以简化纯化过程，改善蛋白质水溶性、产量或纯度。如果标签设置有蛋白酶酶切位点，则可以在纯化后将其去除，而酶切的效率因目标蛋白质而异。选择适当的标签对于蛋白的表达和纯化至关重要。下表概述了常用的蛋白标签及其优缺点。

3. 为什么在细菌系统中我的质粒载体没有表达重组蛋白？

在细菌系统中，重组蛋白没有正常表达通常有以下原因：

☛ 质粒没有被转化至合适的宿主菌

当质粒没有被转化至合适的宿主菌进行诱导将导致重组蛋白不表达。云舟生物制备的载体大多数以VB Ultrastable^TM菌株为宿主菌，该菌株可以为质粒在细菌中保持其良好的稳定性，但是不适合进行重组蛋白表达。

对于重组蛋白的生产，我们建议使用BL21（DE3）或HMS174（DE3）作为宿主株。这些宿主株携带有由LacUV5启动子驱动表达的T7 RNA聚合酶基因拷贝。如果您的目的基因表现出细胞毒性，则可以使用携带pLysS或pLysE基因的质粒。这类质粒可产生T7溶菌酶（一种T7 RNA聚合酶抑制剂）以抑制目的基因的背景表达。

☛ 重组蛋白不适合从质粒载体上直接表达

一些情况下，表达的重组蛋白是不可溶的、错误折叠的、被不恰当剪切的、或者对宿主菌有毒性的，这些情况将导致很低的蛋白产量。对此通常需要优化您的诱导表达条件、使用更具容忍度的宿主或更换表达载体。

☛ 诱导表达条件未经恰当优化

根据表达的基因、表达载体和宿主菌的不同，您需要为您的诱导表达条件考虑以下几点：OD600值（通常为0.6-0.8）；诱导物浓度（IPTG或L-阿拉伯糖）不能过高或者过低；诱导时间不能过长或过短；诱导温度，特别是对于某些容易产生表达问题的蛋白，需要尝试用不同的温度（如16℃、25℃、30℃、37℃等）进行诱导表达。

极少情况下，由于未知原因，同一个表达载体的不同克隆可能表现出不同的诱导表达效果，因此您需要筛选足够的克隆进行测试以获得效表达果最佳的克隆。

4.在哺乳动物细胞系中，选择HEK293还是CHO细胞系用于重组蛋白表达？ 

对于瞬时转染应用，HEK293细胞可作为首-选。HEK293细胞易于转染，有成熟且高效的操作流程，性价比高。此外，HEK293细胞在实验室中易于传代和维持，并表现出很高的蛋白表达水平。

相比之下，CHO（中国仓鼠卵巢）细胞在转染方面更具有挑战性。CHO更适合生物制药应用，特别是用于生产治疗性抗体或治疗性蛋白。超过70%的生物治疗药物的生产需要使用到这种细胞系。

5.如何选择昆虫细胞系用于重组蛋白表达？

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