重磅上线｜抗体发现服务上新，赋能抗体药物研发

单克隆抗体（mAb）是由单一B细胞克隆生成的高度特异性抗体，作为生物医药领域的核心技术之一，其广泛应用于疾病的治疗、诊断和研究。目前主流技术中，传统杂交瘤技术通过融合免疫小鼠B细胞与骨髓瘤细胞筛选分泌抗体的杂交瘤细胞，使用这种方法生产的抗体已达数百种，而这些抗体如今成为了治疗癌症等多种疾病的基础；而新兴噬菌体展示技术利用基因工程将抗体基因与噬菌体结合，单次实验即可筛选数百万候选抗体，凭借高通量、高灵活性优势正重塑抗体研发格局。

VHH（Variable Heavy-chain Homodomain）抗体，又称纳米抗体（Nanobody），是一种从骆驼科动物（如羊驼、骆驼）体内发现的单域抗体。VHH是重链抗体的可变区域，是最小的抗原结合单位之一。VHH分子量小，CDR3区域更长，与传统抗体相比具有多种优势，包括更好的抗原识别能力、更高的稳定性与组织穿透能力，并且更易于进行工程改造。运用噬菌体展示技术进行VHH抗体发现的典型流程如下：

1. 抗原制备和动物免疫

用于动物免疫的抗原类型具有多种选择，包括可溶性蛋白、短肽、DNA、mRNA、全细胞、AAV以及VLP等。一般而言，可溶性蛋白因其易于获取且用量可控通常是首-选的免疫原，但当目标抗原为膜结合蛋白或其免疫原性较低时，这类蛋白将不会是优选。这种情况下可考虑使用其它免疫策略，包括使用全细胞、DNA、mRNA、VLP以及病毒形式的抗原进行免疫。对于VHH抗体而言，其免疫动物常使用羊驼作为动物平台。

2. 噬菌体文库构建

构建噬菌体文库的抗体序列既可源自羊驼的天然提取，也可采用人工合成的方式。合成文库和天然文库均能提供丰富的抗体序列多样性。然而，对于抗体而言，其高结合亲和力通常与动物免疫后产生的序列紧密相关。经过收集后抗体序列将被克隆到噬菌粒载体，然后进行转化和噬菌体组装。对于构建好的噬菌体展示文库，每一个重组噬菌体的表面展示了一种单克隆抗体。噬菌体展示文库的均一性和整体质量可通过NGS验证。

3. 文库筛选和抗体发现

噬菌体文库需要进行进一步的淘筛以富集具有功能的噬菌体克隆。云舟生物开发了一种专有的基于序列的文库筛选方法，可对抗体的亲和力分数进行显著更高通量且无偏倚的测量。经过3-5轮富集后，分数排名靠前的重组噬菌体将采用ELISA或流式细胞术进一步验证其抗体的亲和力。

杂交瘤技术是一种用于抗体发现的经典方法。数十年来，使用这种方法生产的抗体已达数百种，而这些抗体如今成为了治疗癌症等多种疾病的基础。杂交瘤的筛选过程包括需要制备能产生单克隆抗体的细胞系以及筛选出最佳的候选抗体以进行后续的开发。一个典型的基于杂交瘤技术的抗体发现流程如下：

1. 抗原制备和动物免疫

杂交瘤技术通常采用小鼠作为免疫宿主。在众多小鼠品种中，野生型小鼠因其免疫反应的多样性而被广泛使用。随着技术的不断进步，人源化小鼠的使用正逐渐成为新的趋势。HuAb是一种新近开发的人源化小鼠模型，它通过完全替换抗体轻重链的可变区基因为人源基因，从而在体内实现治疗性抗体的“一站式”发现。

这项技术使得研究人员能够跳过后续的抗体人源化过程，有效缩短抗体开发周期近一年。对于需要进行跨物种抗体或替代性抗体研究的场合，除了小鼠之外，仓鼠、大鼠等其他啮齿类动物也可作为免疫宿主。免疫小鼠时，可溶性蛋白、短肽、DNA、mRNA、全细胞、AAV以及VLP等多种类型的抗原均可使用。

2. 杂交瘤开发

杂交瘤技术将细胞分泌目标抗体的能力与细胞的永生特性相结合。从免疫动物体内提取的B细胞通过电融合技术与骨髓瘤细胞融合，随后对杂交瘤细胞系进行的早期的区分和单独扩增。当前通过先进的电融合技术，可将细胞的融合率提高至0.1%-1%。

3. 杂交瘤筛选与抗体发现

抗体筛选流程是抗体发现的关键环节。在杂交瘤细胞扩增后，含有分泌抗体的上清液需经过筛选以确定理想候选抗体。云舟生物提供多种筛选策略，单次筛选可处理至多10,000个克隆。

经过筛选确定后的头部候选抗体会加以表达和纯化以进行全面的特征分析。这些分析范畴可包括：

• 抗原识别的特异性

• 通过生物层干涉技术（BLI）测量抗体的亲和力并排序

• 抗体测序

• 表位分组

• 交叉反应性评估

• 体外功能分析

对anti-AAV VHH抗体的全面特征分析。每个候选抗体以VHH-Fc的形式重新表达。（A）候选抗体的KD值通过BLI测定，结果表明测试的两个VHH抗体具有很高的亲和力。（B）AAV9候选抗体的结合曲线，用于计算EC50值。（C）体外中和试验表明两个VHH抗体均能有效阻碍AAV1感染293T细胞。NC组中无添加任何抗体。IMS：免疫后的小鼠血清；NC：阴性对照。

对于从羊驼体内筛选得到的抗体，其应用于治疗用途前还需要进一步的优化处理。这些优化步骤通常包括抗体人源化、亲和力成熟以及可开发性早期阶段的优化等。值得一提的是，若采用先进的人源化小鼠平台进行抗体发现，则无需对抗体再进行额外的人源化和亲和力成熟步骤。

此外，随着治疗性抗体市场的快速发展，抗体的工程改造也已成为抗体药物研发的必要步骤。常见的抗体工程改造方式包括Fc工程改造、双特异性工程改造、生物偶联、CAR工程改造以及通过细胞稳转株表达抗体等。

HuAb人源化小鼠作为一种新型平台用于体内人源抗体的发现。（A）B细胞的RNA测序结果显示HuAb小鼠产生的抗体免疫组库与人类的高度相似。（B）基因组测序结果显示HuAb产生的抗体无论从深度还是多样性上均可靠地覆盖了完整的人类抗体免疫组库。（C）与野生型C57BL/6小鼠对比，HuAb具备更强的免疫反应。3rd和4th 分别代表第三轮和第四轮免疫。NS：阴性血清。

云舟生物凭借在基因递送领域的专业知识，可为单克隆抗体的治疗应用提供全面的抗体发现和开发解决方案。我们具备从多种动物模型、免疫策略和筛选技术中灵活挑选的优势，致力于为您提供满足需求的理想抗体。