基于MiniVec™专利技术——LentiBuilder™慢病毒包装试剂盒，快至3天出毒！

VectorBuilder基于其丰富的慢病毒包装经验和专有的MiniVec™质粒载体技术，当前隆重推出LentiBuilder™慢病毒包装试剂盒，旨在帮助研究者根据自己实验需要，在自己实验室即可轻松制备与商品化病毒质量相当的高滴度第三代慢病毒。

该试剂盒包含两个组分：经过配比与浓度优化的包装质粒预混液，以及用于高效转染包装细胞的转染试剂。所有包装质粒均采用VectorBuilder MiniVec™技术构建，可进一步提升所生产慢病毒的滴度、安全性、活性及批次一致性。

 

使用LentiBuilder™包装慢病毒的优势

高滴度：可包装出超高滴度（10⁷-10⁸ TU/ml）的常规慢病毒，同时也能产出超大基因组的慢病毒。

使用简易：整个系统由一管包装质粒以最佳的比例混合的预混液和一管高效的细胞转染试剂组成，简化实验操作。

高兼容性：与VectorBuilder设计的转移质粒载体高度兼容。

 

使用方法

使用LentiBuilder™慢病毒包装试剂盒的包装慢病毒的步骤如下：

需准备以下试剂：

· 转移质粒（可从VectorBuilder设计和订购）

· 包装细胞（比如HEK293T细胞）

· 细胞完全培养基

· 无血清DMEM培养基

 

1.转染前一天（第0天）

将5-6×10⁶个包装细胞（比如HEK293T细胞）接种于经过TC表面处理的10 cm培养皿。接种时请确保细胞分布均匀，然后将细胞置于37℃、5% CO₂的二氧化碳培养箱中过夜培养。转染时细胞密度应达到60%-80%汇合率。

 

2.转染当天（第1天）

•  转染前，将培养皿中的培养基更换为9 ml的新鲜完全培养基，孵育1小时以达到平衡状态。

•  将以下试剂加入2 ml Eppendorf 离心管中，使用移液枪轻柔混匀。

 

向稀释后的转移质粒DNA中加入36 ul LentiBuilder™细胞转染试剂，轻柔涡旋5秒，室温孵育该混合溶液10-20分钟。

•  使用移液枪轻柔吹打混合溶液三次，然后逐滴加入10 cm培养皿。轻轻晃动培养皿以确保混合液分散均匀。

•  孵育细胞5小时后，更换10 ml新鲜的完全培养基。继续在37℃、5% CO₂条件下孵育细胞直至可收获慢病毒。

 

3.转染后第48小时（第3天）

•  收集含有慢病毒的上清液。转染后第48小时收集的样本，必要时，也可与第72小时的样本（第4天）合并收集。对于此类情况，需添加10 ml的新鲜细胞完全培养基，然后将细胞置于37℃、5% CO₂二氧化碳培养箱中继续孵育直至下一次收获病毒。

• 1,500×g离心10分钟，然后使用0.45 um滤膜过滤上清夜以去除细胞碎片。

•  由该试剂盒单次反应生产的慢病毒其典型滴度为10⁷-10⁸ TU/ml。该病毒可直接用于后续转导实验，或保存于-80℃备用。

 

 

 

 使用LentiBuilder™慢病毒包装试剂盒生产慢病毒示意图

 

包装效果对比

我们对不同的慢病毒包装系统进行了测试对比，实验采用了不同的转基因以及多种病毒基因组大小的转移质粒。所有系统均使用等量转移质粒，并按照各系统推荐的包装质粒用量和比例进行配置。实验采用qPCR测定293T细胞中的病毒功能滴度。结果表明，LentiBuilder™在所有载体类型中均持续超越其主要的竞争对手，即使对于基因组超大（>9.2 kb）的慢病毒也能获得高效进行包装并获得很高的滴度。

关于此慢病毒包装试剂盒的更多信息，请联系我们。